近日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了《人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則》（2025年第4號），人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑采用熒光探針PCR法，對預(yù)期或正在服用葉酸的高同型半胱氨酸血癥患者的靜脈全血或口腔拭子等樣本DNA中的MTHFR基因多態(tài)性進行體外定性檢測的試劑，用于葉酸的用藥指導(dǎo)。一起來學(xué)習(xí)人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑臨床試驗設(shè)計要點。
近日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了《人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則》（2025年第4號），人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑采用熒光探針PCR法，對預(yù)期或正在服用葉酸的高同型半胱氨酸血癥患者的靜脈全血或口腔拭子等樣本DNA中的MTHFR基因多態(tài)性進行體外定性檢測的試劑，用于葉酸的用藥指導(dǎo)。一起來學(xué)習(xí)人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑臨床試驗設(shè)計要點。
人MTHFR基因多態(tài)性檢測試劑臨床試驗設(shè)計要點
臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗機構(gòu)
應(yīng)選擇不少于3家（含3家）已備案的臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素選擇臨床試驗機構(gòu)。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，操作人員應(yīng)熟悉臨床試驗方案及檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)。
2.臨床試驗方法
2.1對于有已上市同類產(chǎn)品（突變位點為C677T，rs1801133）的產(chǎn)品，建議申請人選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，評價申報產(chǎn)品的臨床性能。對比試劑的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測性能等方面，確認(rèn)其與申報產(chǎn)品具有較好的可比性。
2.2如申報新的突變位點用于葉酸用藥指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)其公認(rèn)的臨床意義，提供其適用人群相應(yīng)的臨床意義的證據(jù)及性能驗證臨床試驗。性能驗證臨床試驗中可以選擇公認(rèn)的參考方法（如Sanger測序法）作為對比方法，評價其突變位點的檢測性能。臨床意義的證據(jù)應(yīng)包括新的突變位點基因型與血液同型半胱氨酸含量、紅細(xì)胞中葉酸含量，服用葉酸劑量與相應(yīng)結(jié)局的相關(guān)性研究證據(jù)。
針對Sanger測序和相關(guān)性研究分析方法（如涉及）的建立、驗證和質(zhì)量控制，應(yīng)提交詳細(xì)的研究論述，相關(guān)內(nèi)容納入臨床試驗報告中。
3.受試者選擇和樣本類型
3.1受試者選擇
臨床試驗中應(yīng)選擇高同型半胱氨酸血癥患者作為適用人群。如需要服用或正在服用葉酸的H型高血壓等心腦血管疾病患者等。
如涉及新的位點及臨床使用場景，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的適用人群納入受試者。
3.2 樣本類型
適用的樣本類型一般為靜脈抗凝全血，應(yīng)采用相同樣本類型的已上市同類產(chǎn)品進行比較研究。
如產(chǎn)品同時適用于口腔拭子，可與相同樣本類型或靜脈全血的已上市同類產(chǎn)品進行比較研究；也可采用與申報產(chǎn)品的靜脈全血進行同源比對的方式進行評價，純合突變型/雜合突變型/野生型樣本例數(shù)建議均不少于100例。
臨床試驗中應(yīng)以臨床原始樣本進行試驗，不應(yīng)直接采用提取的基因組DNA。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)同時滿足申報產(chǎn)品說明書以及對比試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。
4.臨床試驗樣本量
臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進行估算，同時應(yīng)滿足法規(guī)最低樣本量的要求。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗設(shè)計，本臨床試驗可依據(jù)申報產(chǎn)品相對于對比試劑的純合突變型/雜合突變型/野生型符合率分別估算相應(yīng)的最低樣本例數(shù)。
與對比試劑的比較研究中，臨床樣本量的估算建議采用單組目標(biāo)值法進行計算，純合突變型/雜合突變型/野生型符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議均不低于95%。當(dāng)評價指標(biāo)PT接近100%時，該樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進行樣本量估算和統(tǒng)計學(xué)分析，如精確概率法等。
5.統(tǒng)計學(xué)分析
依據(jù)年齡、性別和臨床診斷背景信息等，對納入統(tǒng)計的病例進行人口學(xué)分析。
總結(jié)野生型、雜合突變型和純合突變型的例數(shù)，以3×3表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，并分別計算各基因型的符合率、總體符合率及其95%置信區(qū)間，對定性結(jié)果進行kappa檢驗，以評價兩種試劑檢測結(jié)果的一致性；以交叉四格表分別總結(jié)兩種試劑對野生型及突變型（包括雜合突變型和純合突變型）的定性檢測結(jié)果，計算符合率、總符合率及其95%置信區(qū)間，并對定性結(jié)果進行kappa檢驗，以驗證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。
對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用合理方法進行復(fù)核，并對差異原因進行分析。
6.倫理學(xué)要求
臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險，提請倫理委員會審查，并獲得倫理委員會的同意。注冊申報時應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。
7.臨床試驗方案
各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程。
試驗方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結(jié)果判定時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。
8.質(zhì)量控制
臨床試驗開始前，建議進行臨床試驗的預(yù)試驗，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及精密度。
9.臨床試驗小結(jié)與報告
臨床試驗的小結(jié)與報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法，最后得出臨床試驗結(jié)論。臨床試驗報告的撰寫參考《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。